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梯度實驗常見的問題與解決方案
點擊次數(shù)：2194 發(fā)布時間：2019-09-18
梯度實驗常見的問題與解決方案
*，做HPLC分析時梯度系統(tǒng)可以在縮短分析時間的同時而不影響樣品的分離，但是簡便的同時也伴隨著多種多樣的問題，就筆者個人總結(jié)，常見的問題有三點：
（1）兩相混合后產(chǎn)生氣泡
緩沖鹽溶液與純甲醇走梯度產(chǎn)生的氣泡圖，對此我們公司通常的解決方法是使用“反壓調(diào)節(jié)器”使紫外檢測池有一定的壓力，阻止氣泡形成。其次通常我們不建議使用純的有機(jī)相如純甲醇，純乙腈作流動相。
（2）梯度基線漂移問題
此問題一般發(fā)生在梯度線形變化的時候，而在低波長下基本不可避免。因為色譜常用的甲醇和乙腈在低波長（如210nm）下是有吸收的，如果基線隨著有機(jī)相不斷增多而上漂或者隨著有機(jī)相的不斷減少而下漂，這不僅是正常現(xiàn)象，還反映了系統(tǒng)的靈敏性和性。所以這個問題無法消除，只能通過選擇更的有機(jī)溶劑來降低基線漂移的程度，如乙腈的工業(yè)污染物為丙酮（有的紫外吸收），選擇更的乙腈可以地降低梯度漂移的程度。
（3）梯度鬼峰
這個問題可以一分為二，梯度鬼峰有偶然情況和必然情況兩種。
偶然情況為流動相未經(jīng)良好脫氣，溶解氧能與某些有機(jī)溶劑形成有紫外吸收的絡(luò)合物，而出現(xiàn)的吸收，此種情況沒有重復(fù)性，可以通過良好的流動相脫氣而避免。
可能還有些問題這里未能總結(jié)，得通過化學(xué)工作者不斷去發(fā)現(xiàn)和總結(jié)，遇到問題解決問題是化學(xué)工作者的基本工作，實事求是是化學(xué)工作的基本要求。
必然情況即隨著梯度運行形成一些莫名其妙的峰，并且有*的重復(fù)性，不可避免，一般發(fā)生在梯度有大的變化的時候。遇到這樣的情況不要擔(dān)心，做一個梯度空白對照，只要梯度鬼峰不影響樣品的出峰即可。
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